中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量測(cè)定方法 GB/T 14931.1-94
(高效液相色譜法)
Method for determination of oxytetracyline tetracyline and
chlortetracycline residues in meat (HPLC)
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1　主題內(nèi)容與適用范圍
　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的檢測(cè)方法。
　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種食用畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留量的測(cè)定。最低檢出濃
度為：0.15，0.20, 0.65mg/kg。
2　原理
　　樣品經(jīng)提取，微孔濾膜過(guò)濾后直接進(jìn)樣，用反相色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，與標(biāo)準(zhǔn)
比較定量，出峰順序?yàn)橥撩顾亍⑺沫h(huán)素、金霉素。標(biāo)準(zhǔn)加法定量。
3　試劑
3.1　乙腈(分析純)。
3.2　0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液：稱(chēng)取1.56 g(±0.01g)磷酸二氫鈉(NaH2PH4.2H2O)溶于
蒸餾水中，定容到100 mL，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)過(guò)濾，備用。
3.3　土霉素(OTC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取土霉素0.0100g(±0.0001g)，用0.1mol/L鹽酸溶液每毫
升含土霉素1mg。
3.4　四環(huán)素(TC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取四環(huán)素0.0100g(±0.001g)，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解
并定容10.00 mL，此溶液每毫升含四環(huán)素1mg。
3.5　金霉素(CTC)標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱(chēng)取金霉素0.0100g(±0.0001g),溶于蒸餾水并定容成10.00
mL，此溶液每毫升含金霉素1mg。
　　以上標(biāo)準(zhǔn)品均按1000單位/mg折算。3.3～3.5溶液應(yīng)于4℃以下保存，可使用1周。
3.6　混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：取3.3、3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.00 mL，取3.5標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00 mL，置于10mL
容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環(huán)素各0.1mg，金霉素0.2mg，臨
時(shí)現(xiàn)配。
3.7　5％高氯酸溶液。
4　儀器
4.1　高效液相色譜儀(HPLC)：具紫外檢測(cè)器。
5　色譜條件
5.1　柱：ODS-C18 (5 μm)　6.2mm×15 cm。
5.2　檢測(cè)波長(zhǎng)：355 nm。
5.3　靈敏度：0.002 AUFS。
5.4　柱溫：室溫。
5.5　流速：1.0mL/min。
5.6　進(jìn)樣量：10 μL。
5.7　流動(dòng)相：乙腈/0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液(用30％(V/V)硝酸溶液調(diào)節(jié)pH2.5),35:65
(V/V)，使用前用超聲波脫氣10 min。
6　操作方法
6.1　樣品測(cè)定：稱(chēng)取5.00 g(±0.01 g)切碎的肉樣(＜5 mm)，置于50 mL錐形燒瓶中，加
入5％高氯酸25.0mL，于振蕩器上振蕩提取10 min，移入到離心管中，以2000 r/min離心
3min,取上清液經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾,取溶液10μL進(jìn)樣, 記錄峰高，從工作曲線上查得含量。
6.2　工作曲線，分別稱(chēng)取7份切碎的肉樣，每份5.00 g(±0.01 g)，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶
液0、25、50、100、150、200、250 μL(含土霉素、四環(huán)素各為0、2.5、5.0、10.0、15.0
、20.0、25.0 μg, 含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 μg), 按6.1方法操
作、以峰高為縱坐標(biāo), 以抗生素含量為橫坐標(biāo), 繪制工作曲線。