趙娟(新鄉(xiāng)市農(nóng)業(yè)科學)

玉米種子純度鹽溶蛋白電泳鑒定較傳統(tǒng)的生態(tài)方法具有速度快、準確可靠、成本低廉、技術(shù)比較容易掌握等優(yōu)點，在檢驗工作中應(yīng)用廣泛。但它涉及到化學、生化、遺傳學和植物學等多方面的知識，測定操作步驟較為繁瑣，在實際操作中往往會出現(xiàn)一些問題．影響鑒定的正常進行。下面結(jié)合多年在實踐工作中的經(jīng)驗和教訓，現(xiàn)將電泳操作中應(yīng)注意的問題敘述如下，供同行參考。

1 溶液配制中需注意的問題

此過程需用化學試劑配制多種操作溶液，化學試劑的純度和質(zhì)量直接影響到所配溶液的濃度，進一步影響到實驗結(jié)果。因此，所用試劑(丙稀酰氨、N—N’亞甲基雙丙稀酰氨、氯化鈉等)均為分析純。若不易買到分析純，應(yīng)注意購買大廠生產(chǎn)的合格的化學純試劑，并根據(jù)其溶解度的好壞適當增加試劑比例。各溶液應(yīng)按配方認真稱量，嚴格配制。所有溶液應(yīng)裝在棕色瓶中置冰箱貯藏室保存。由于個別試劑容易失效，如硫酸亞鐵、抗壞血酸、過氧化氫等，其溶液一般應(yīng)在兩周內(nèi)使用或現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意，有些試劑具有毒性或腐蝕性，如丙烯酰胺、N—N’—亞甲基雙丙烯酰胺、三氯已酸、過氧化氫，使用時應(yīng)小心操作。

2樣品提取需注意的問題

取樣要有代表性，隨機取樣，不能取霉爛、變質(zhì)、蟲蛀或病粒種子，以防由于蛋白質(zhì)變性和異種蛋白影響實驗結(jié)果。樣品粉碎時．每粉碎一粒種子應(yīng)將粉樣器上的種子粉末擦凈，避免子粒間交叉污染。提取液加入后應(yīng)充分搖勻，提取期間至少搖兩次。樣品提取時間不宜太長，一般不超過4h。

3凝膠制備需注意的問題

玻璃板一定要洗凈、擦干，否則，電泳凝膠會粘在玻璃板上難以剝離。另外，電泳槽的四個固定螺絲用力要一致，否則會出現(xiàn)凝膠厚度不勻或者漏電極液現(xiàn)

象。

凝膠配制時應(yīng)嚴格配比，均勻一致，避免出現(xiàn)凝膠速度太快或凝膠不聚合現(xiàn)象。灌膠時要充分搖勻，迅速從一端灌人，避免產(chǎn)生氣泡和凝膠不勻。封分離膠時動作要輕，以免沖環(huán)膠面，造成膠面不平。樣品梳要插平，拔出時要小心輕拔。

4加樣電泳需注意的問題

加樣量應(yīng)保持準確一致。太多，譜帶不清；太少，可能丟失某些譜帶。每點一個樣品要用去離子水清洗進樣器二三次，防止交叉污染。電泳時電極勿接反。電泳溫度一般在15～20℃。

5染色觀察需注意的問題

取膠板時要小心操作。若有粘板現(xiàn)象，是玻璃板沒洗干凈或是玻璃板劃傷發(fā)毛，應(yīng)更換。

染色時，染色液可重復(fù)使用2次。但需再適量補加三氯已酸和考馬斯亮蘭R250-乙醇溶液。

6譜帶分析需注意的問題

在品種電泳鑒定時，應(yīng)首先在Ζ區(qū)尋找其特征譜帶，必要時觀察另外兩區(qū)的譜帶作為輔證。

注意用標準種子或該品種的標準圖譜帶進行對照。如果沒有找到標準種子或標準圖譜的玉米雜交種，在電泳時最好用其親本自交系種子進行對照。若樣品譜帶具有一對以上雙親的互補型譜帶(雜交種的一條譜帶和父本自交系的一致，另一條同母本自交系的一致，則這兩條譜帶稱作互補帶)，則該樣品為兩親本雜交制成的雜交種；若樣品譜帶與兩親本譜帶無互補關(guān)系，則該樣品可能是異品種；若樣品譜帶與某一親本譜帶完全一致，則該樣品為親本種子。